Diabetologia：转录但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常显现出现肝细胞自身HIV到经常显现出现1M-乳癌诊疗症状的成果率在儿童末期就有很好的说明了，多个肝细胞自身HIV构造性的儿童里有70%在血清变换后10年中患乳癌，而随访15年的儿童这一比例减少到84%。比起之下，占诊疗1M-乳癌一半以上的M-1M-乳癌的中风程序还从未得到更好的研究课题。

越来越多的人开始用于分期系统来表述1M-乳癌的成果：变异在经常显现出现多种肝细胞自身HIV时转回第1阶段，经常显现出现血糖异常时转回第2阶段，经常显现出现症状时转回第3阶段。一些多发肝细胞自身HIV构造性的变异，在1期和2期，成果较慢，并蓬勃发展为中风的1M-乳癌。我们之前说明了了一第三组在首次检查到多种肝细胞自身HIV样本后至少10年无乳癌的极慢成果者，这第三组病症人数少，但构造非常具体。随后，我们找到肝细胞自身抗体特异性CD8+T巨噬细胞化学反应当在成果快速的病症里基本不存在，但在同类M-中风和经常性存在的乳癌病症里很容易检查到。这可能表明，与成果病症比起，这些病症自身免疫化学反应当的调节提升。

20世纪研究课题表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但乳癌病症存在一些功能缺陷，其里包括对IL-2的化学反应当灵活性增高。此外，乳癌病症里的效应当CD4+T巨噬细胞可能对调节更具抵抗性，平庸为效应当T巨噬细胞的减缓减慢，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及抗体经历的CD4+T巨噬细胞里IL-2化学反应当减慢。本研究课题的目的是说明了了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群极快速成果者里的构造，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以群体为基础的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病症亲属里核对1M-乳癌的有可能考量。我们之前说明了了经常性快速成果者的构造，他们始终保持多重肝细胞自身HIV构造性超过10年，但从未经常显现出现乳癌的诊疗症状，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续始终保持无乳癌并愿意提供大量血液样本的快速成果者纳入T和B巨噬细胞功能分析。在现今的研究课题里，8名慢成果者(SP第三组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身HIV构造性。所有的参与者都始终始终保持1M-乳癌成果的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身HIV对某些抗体的构造性化学反应当，然而，一名病症已经始终始终保持2期至少6年，但从未经常显现出现诊疗症状，一名病症被诊断为乳癌，该受试者72岁，在捕获实验样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在分析里对该供体开展了单独分析报告。分离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞精和T巨噬细胞减缓试验分析报告供体里Treg的基频、遗传和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、并不一定和回归)开展无全权负责聚类分析，分析报告Treg遗传。

结果：与健康供体比起，来自慢成果体的遗忘CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类表明，触发的遗忘CD4+ Treg基频减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)理解减少有关。一名HbA1c升温的病症与成果快速者和匹配的依此第三组比起，Treg谱有所不同。功能分析表明，与健康供体比起，来自快速成果体的Treg介导的CD4+效应当T巨噬细胞减缓明显受损。平庸为对效应当CD4+T巨噬细胞CD25和CD134理解的减缓减少。

平面图1 深入的遗传分析表明，CD4+Treg亚M-在慢成果路由表里减少。由FlowSOM生成的Treg室，挤满在来自所有供体的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物理解鉴定显现出10个元簇:遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用于9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个终端代表人一个一个大(100个一个大)，更多的元一个大(10个元一个大)在终端第三组附近上色。每个终端里的饼平面图对此单个标示的理解级别。(b)每个元聚类的热平面图，以表明结构上标示理解。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成平面图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于金属量为每个metacluster箱内新线平面图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T巨噬细胞(l)。橘色左上角代表人捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的相吻合证实，Treg基频的减少是成果快速的logo。分级离子通道(a - f)和水果分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的关联性。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表人性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解开展分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及供体SP 606(橘色)里CD25+ cd127的基频综合平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的箱内新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解切变着色，记号凸显的簇被辨认为SP和HD路由表之间的不同。(j)箱内新线平面图表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组里，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于金属量(比例)。(k)直方平面图表明每个簇的遗传(粉红色)和Treg标示相对于理解与剧中理解(深蓝色);上列，缓存Treg_3;上面一行，缓存Treg_4。剧中与所有其他簇里标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

平面图3 与健康献血者比起，成果快速者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T巨噬细胞元簇(遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的理解热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解相联，表明直方平面图(c)和综合平面图(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有供体包括，p< 0.05(深蓝色)供体SP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR理解，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)相联，表明直方平面图(e)和综合平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

平面图4 来自快速成果的CD4+ treg巨噬细胞遏制效应当CD4+T巨噬细胞的灵活性增高。SP第三组用深蓝色的新线和左上角对此，HD第三组用粉红色的新线和左上角对此，橘色的新线/左上角对此供体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(转发者)被标示为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培训3天后开展流式巨噬细胞精检查。(a-d)与CD4+转发者相对于应当的treg培训(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE减缓百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百份。用于构造性依此(触发的响应当巨噬细胞不含treg)计算减缓百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 效应当CD4+T巨噬细胞对快速成果的T巨噬细胞重置的减缓更敏感。SP第三组用深蓝色的新线和左上角对此，HD第三组用粉红色的新线和左上角对此，橘色的新线/左上角对此供体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培训3天后开展流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培训。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE减缓三份(b)。(c,d) CD25减缓三份(c)和CD134减缓三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们证明了的论点是，来自快速成果子的重置遗忘CD4+Treg在GITR理解里得到了延展和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1M-乳癌不确定性变异里的异质性的必要。

原文显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28